內(nèi)容大綱
什么是微生物檢測?
飲用與包裝水的水質(zhì)規(guī)范
常見水中微生物檢測方法
水中微生物檢測流程
挑選微生物檢測設備的兩大重點
因此微生物的檢測可確認樣品中特定微生物的存在狀況與數(shù)量,或可監(jiān)測環(huán)境及產(chǎn)品是否受到污染及受污染的程度,是制藥、食品、飲料、化妝品等行業(yè)中重要的質(zhì)量管控項目 (quality control),以確保最終產(chǎn)品的安全。
水是自然界重要的生物資源之一,生物皆賴以為生,而致病性微生物的接觸、攝入是其主要風險之一。為維護生態(tài)環(huán)境及保障用水的安全,微生物含量的監(jiān)測不可或缺,是評估衛(wèi)生、質(zhì)量的常用指標。
我國對于微生物的規(guī)范,除了河川、湖泊、海域等環(huán)境的地面水體外,也訂定飲用水、包裝及盛裝飲用水等相關(guān)規(guī)范。
依我國行政院環(huán)保署及衛(wèi)生福利部公告水質(zhì)微生物標準整理如下。其中針對市售包裝/盛裝飲用水,除了在水源、水質(zhì)須符合飲用水水源及水質(zhì)相關(guān)規(guī)范外,水體經(jīng)處理后也應符合我國衛(wèi)生福利部公告之食品中微生物衛(wèi)生標準。
常見的水質(zhì)檢測標準
1、生活飲用水參考標準:
GB 5749-2006 生活飲用水衛(wèi)生標準
GBT 5750.1-2006 生活飲用水標準檢驗方法 總則
GBT 5750.2-2006 生活飲用水標準檢驗方法 水樣的采集和保存
GBT 5750.3-2006 生活飲用水標準檢驗方法 水質(zhì)分析質(zhì)量控制
GB/T 5750.4-2006 生活飲用水標準檢驗方法 感官性狀和物理指標
GB/T 5750.5-2006 生活飲用水標準檢驗方法 無機非金屬指標
GB/T 5750.6-2006 生活飲用水標準檢驗方法 金屬指標
GB/T 5750.7-2006 生活飲用水標準檢驗方法 有機物綜合指標
2、工業(yè)鍋爐用水標準:
GB/T 6904-2008 工業(yè)循環(huán)冷卻水及鍋爐用水中pH的測定
GB/T 6911-2007 工業(yè)循環(huán)冷卻水和鍋爐用水中硫酸鹽的測定
GB/T 12152-2007 鍋爐用水和冷卻水中油含量的測定
GB/T 13689-2007 工業(yè)循環(huán)冷卻水和鍋爐用水中銅的測定
GB/T 12149-2007 工業(yè)循環(huán)冷卻水和鍋爐用水中硅的測定
GB/T 14424-2008 工業(yè)循環(huán)冷卻水中余氯的測定
GB/T 15456-2008 工業(yè)循環(huán)冷卻水中化學需氧量(COD)的測定 高錳酸鉀法
GB/T 15453-2008 工業(yè)循環(huán)冷卻水和鍋爐用水中氯離子的測定
3、工業(yè)廢水相關(guān)標準:
GB3544-2008造紙工業(yè)水污染物排放標準
GB4914-2008海洋石油開發(fā)工業(yè)含油污水排放標準
GB4287-92紡織染整工業(yè)水污染物排放標準
GB13457-92肉類加工工業(yè)水污染物排放標準
GB13458-2001合成氨工業(yè)水污染物排放標準
GB13456-92鋼鐵工業(yè)水污染物排放標準
GB 20425-2006皂素工業(yè)水污染物排放標準
GB 20426-2006煤炭工業(yè)污染物排放標準
水中微生物的檢測有多種方法,常見的有多管發(fā)酵法 (multiple-tube fermentation method or MPN method)、涂抺法 (spread plate method)、混合稀釋法 (pour plate method) 及濾膜法 (membrane filter method)。
濾膜法是一種廣為使用的分離技術(shù),已于1961年被美國環(huán)保局 (U.S. EPA) 采用。與其它方法相比,濾膜法的優(yōu)勢包含:前置準備工作少、樣品具高度代表性、可降低偽陽(陰)性機率、檢測結(jié)果準確等,是水質(zhì)、液態(tài)樣品中微生物的主要分離技術(shù)。
濾膜法
前置作業(yè)
制備 agar plate
培養(yǎng)時程
24 ± 2 小時
耗材
濾膜、培養(yǎng)皿
樣品處理量
大
適用熱敏感物質(zhì)
是
適用樣品狀態(tài)
低濁度之一般水樣
準確度
高
結(jié)果判定
直接觀察計數(shù)菌落 (colony) 數(shù)量
菌株分離
是
其它
?濾膜可直接轉(zhuǎn)移至不同培養(yǎng)基進行試驗
?可有效移除水樣中抗菌化學物質(zhì)
濾膜法是將液態(tài)檢體經(jīng)一定孔徑的濾膜過濾后,將大于其孔徑的微生物滯留于濾膜上,于適當培養(yǎng)基及環(huán)境下進行微生物培養(yǎng),最后透過觀察、計數(shù)得到樣品中微生物的數(shù)量。
微生物檢測流程以「飲用水中大腸桿菌群檢測方法-濾膜法 (NIEA E230.55B)」 為例:
· 實驗應全程于無菌操作臺中進行。
· 前置作業(yè):將過濾裝置(filtration apparatus)中的不銹鋼濾杯(funnel)及浸泡過 95 % 酒精的鑷子以 電子點火式本生燈進行火焰滅菌,冷卻至室溫備用。
洛科電子點火式本生燈均通過歐盟CE安全認證,快速點火,焰力穩(wěn)定,溫度最高可達 1300℃
檢測步驟:
1. 將無菌濾膜 (sterile membrane filter) 放置于濾杯基座上,加入少量無菌稀釋液,以測定過濾裝置是否裝置妥當。
2. 檢測或稀釋前,劇烈搖晃 25 次以上,以充分混合樣品。
3. 加入 100 mL 水樣以真空幫浦 (vacuum pump) 過濾,再以 20 mL 以上之無菌稀釋液沖洗濾杯。
4. 移開濾杯,取出過濾后之濾膜放置于含有培養(yǎng)基之培養(yǎng)皿上。濾膜應完全與培養(yǎng)基貼合,避免產(chǎn)生氣泡。
5. 將培養(yǎng)基倒置于培養(yǎng)箱 (incubator) 內(nèi),以 35 ± 1 oC 培養(yǎng) 24 ±2 小時。 培養(yǎng)后,取出培養(yǎng)基,以 Galaxy 330 菌落計數(shù)器 (colony counter) 計數(shù)并記錄培養(yǎng)皿中金屬光澤菌落數(shù)。若菌落太多造成計困難時,則以「菌落太多無法計數(shù)」(Too numerous to count; TNTC) 表示。
6. 結(jié)果處理:以公式計算大腸桿菌群密度,單位為 CFU/100 mL (Colony forming units/100 mL)。
水中微生物檢測是將水樣過濾后,再將濾膜放置培養(yǎng)基中進行培養(yǎng),觀察微生物生長的情形。檢測過程中常有多重復樣品需求,且常需倒除大量廢液。在采購相關(guān)設備時,可考慮以下兩大重點:
1) 選擇可以快速滅菌的設備
實驗設備常以高壓滅菌釜 (autoclave) 進行滅菌,動輒需花費數(shù)小時。為了加速實驗流程,除了可以準備多組設備方便交替使用以外,也可考慮使用能夠快速滅菌的材質(zhì),例如以不銹鋼制成的設備,可以直接以火焰滅菌,只需數(shù)秒時間加熱并冷卻后,就能立即檢測樣品。不僅大幅縮短樣品處理時間,也讓流程更順暢。
– 旋卡式設計,輕松操作不需夾具
– SS316材質(zhì),安全堅固耐高溫,可快速火焰滅菌
– 重復使用,環(huán)保更節(jié)省成本,平均可省達46%費用
2) 方便排除廢液。
微生物檢測所過濾的水樣,不需特殊處理即可直接倒除,然而,如果過濾的水樣還要用廢液瓶搜集后再倒掉,等于多花一次功夫。
如果選用具有直接排水設計的設備,就可以將過濾后的廢水直接引導至水槽,省去倒除廢液的步驟、節(jié)省實驗時間。
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